Tunel试剂盒（cy3）

Tunel试剂盒（cy3）

原理： 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA
ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal
Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色FITC或Alexa488/红色荧光探针Cy3(Cyanine 3)标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

产品货号：AW-RCT-50R ；

规格：10T

有效期：12个月

试剂盒组成：

操作流程：

1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。(冬天应提高脱蜡温度或适当延长脱蜡时间）
2. 通透：EDTA或者柠檬酸修复液 95度水浴25min或者蛋白酶K 37℃处理15-30min（通透方式有多钟：1蛋白酶消化，2 Triton X-100通透剂通透，3热修复），玻片置于蒸馏水中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3. 配试剂工作液以及孵育：TdT酶 和tunel反应液按1:50比例混合，此液为tunel工作液，将tunel工作液加入到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱避光孵育30min到2小时（具体需要预实验），湿盒内加少量水保持湿度。
4. DAPI复染细胞核：切片用PBS（PH7.4）洗涤3次，每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
5. 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
6.  镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm；488绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm；CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm）

石蜡切片荧光tunel结果判读

   DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，试剂盒为cy3标记，阳性凋亡细胞核为红色。

备注

1. 为了获得理想的染色效果，应对通透方法时间及tunel工作液孵育时间进行摸索。

2. 所有实验试剂应避免反复冻融。

3. 如用蛋白酶K处理后需充分洗涤去掉多余试剂。

文章引用试剂盒/方法

TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling) staining was performed with a TUNEL kit(Shanghai Recordbio Biological Technology, Shanghai, China) which was based on the principel of TUNEL detects the apoptosis according to the instruction manual.

说明书下载：

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